ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Цель исследования – выявить возрастные изменения бульбоуретральных желез человека и особенности их динамики при доброкачественной гиперплазии простаты.
Материал и методы. Исследовали бульбоуретральные железы мужчин возрастом от 17 до 90 лет (n=44). В группе мужчин второго периода зрелого возраста случаи с доброкачественной гиперплазией простаты и без данной патологии анализировали отдельно. В срезах, окрашенных по методу Маллори и с помощью ШИК-реакции, измеряли морфометрические и оптические параметры, позволяющие оценить возрастные изменения бульбоуретральных желез и охарактеризовать их особенности при доброкачественной гиперплазии простаты.
Результаты. Начиная с юношеского возраста и до старческого периода, в бульбоуретральных железах наблюдалось уменьшение высоты гландулоцитов, площади срезов концевых отделов, суммарной доли паренхимы. Величина оптической плотности цитоплазмы гландулоцитов была максимальной у юношей, а в первом периоде зрелого возраста значимо снижалась. Во втором периоде зрелого возраста и у пожилых изменения этого показателя были незначительны. В старческом возрасте оптическая плотность цитоплазмы гландулоцитов была минимальной среди всех сравниваемых возрастных групп. Наличие в этом периоде ШИК-позитивного материала в клетках указывает на сохранность способности бульбоуретральных желез к выработке секрета. У мужчин второго периода зрелого возраста с доброкачественной гиперплазией простаты значения всех морфометрических показателей паренхимы бульбоуретральных желез были выше, чем в случаях без узловых изменений в простате. При этом оптическая плотность ШИК-позитивного секрета в цитоплазме гландулоцитов в два раза превышала аналогичные значения в группе лиц без данной патологии.
Заключение. Юношеский возраст является периодом максимальной функциональной активности бульбоуретральных желез. Иволютивные изменения паренхимы, происходящие в интервале от первого периода зрелости до пожилого возраста включительно, компенсируются секреторной активностью гландулоцитов достаточной для обеспечения необходимого уровня функционирования желез. В старческом возрасте бульбоуретральные железы сохраняют способность к выработке секрета. У мужчин второго периода зрелого возраста с доброкачественной гиперплазией простаты функциональная активность бульбоуретральных желез повышена в сравнении с лицами без данной патологии.
Цель – оценить влияние различных режимов воздействия малых доз ионизирующего излучения на содержание белка в нейронах головного мозга.
Материал и методы. Исследование с соблюдением правил биоэтики выполнено на 300 крысахсамцах в возрасте 4 мес к началу эксперимента, подвергавшихся радиационному воздействию в суммарных дозах 0.1, 0.2, 0.5 и 1.0 Гр однократно или фракционированно (равными порциями в течение 5 дней) с мощностью дозы облучения 0.5 и 6.6 Гр/ч. После стандартных гистологических процедур нейроморфологическими методиками оценивали морфометрические и тинкториальные показатели нейронов головного мозга, а также динамику содержания белка в нейронах на всей продолжительности жизни животных. Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакетов программ Statistiсa 6.1, с использованием параметрических критериев и математическим моделированием.
Результаты. У контрольных и облученных животных на протяжении всей жизни происходят волнообразные изменения содержания белка в нейронах головного мозга с постепенным снижением показателей к окончанию пострадиационного периода. Регрессионный анализ показал, что облучение в изученных дозах оказывает нелинейное стохастическое влияние на содержание белка в нейронах, не имеет дозовременной зависимости и не вызывает значимых органических изменений в головном мозге. В конце эксперимента, когда наблюдается гибель как облученных, так и контрольных животных содержание белка в нейронах статистически значимо уменьшается во всех группах, но в большей степени у животных, подвергшихся радиационному воздействию. При этом наибольшее снижение содержания белка отмечено в грушевидных нейронах коры мозжечка, а более резистентными к радиационному фактору по содержанию белка оказались нейроны коры теменной доли.
Заключение. Значимых радиационно-индуцированных изменений содержания и топохимии продуктов гистохимических реакций при выявлении белка в структурах нейронов головного мозга не выявлено. В конце эксперимента содержание белка в нейронах теменной коры облученных животных практически соответствовало таковому у животных возрастного контроля, а в других отделах мозга было статистически значимо снижено.
Местные лучевые поражения (МЛП) в форме лучевых язв, сформированные в результате локального воздействия источников ионизирующего излучения, характеризуются длительным волнообразным течением, плохим прогнозом в отношении самостоятельного заживления и требуют специализированных высокотехнологичных способов лечения. Одним из компонентов их патоморфогенеза является поражение сосудов микроциркуляторного русла, что наряду с повреждением клеток эпителиальной и соединительной тканей служит одной из причин морфологических особенностей развития этого вида повреждения. Генная индукция роста сосудов микроциркуляторного русла может стать одним из компонентов местного лечения МЛП.
Цель исследования – оценить влияние проангиогенного геннотерапевтического препарата на основе pl-vegf165 («Неоваскулген», Россия) на процессы заживления в экспериментальной модели длительно незаживающих тяжелых местных лучевых поражений (язв).
Материал и методы. Эксперимент проведен на белых крысах-самцах (n=40), которые были разделены на 4 группы по 10 животных: контроль, группа с однократным введением препарата через 14 сут после облучения, группа с двукратным введением через 14 и 27 сут, и группа с однократным поздним введением – через 35 сут. Основным критерием оценки заживления была макроскопическая планиметрия. Выполнены рутинные гистологическое и морфометрическое исследования.
Результаты. Установлено, что статистически значимые различия динамики заживления МЛП по критерию площади язвенной поверхности получены между группами контроля и экспериментальными группами в отдаленный период – при наблюдении более чем через 60 сут.
Заключение. Выявленный результат может быть объяснен динамикой развития новых сосудов микроциркуляторного русла, образовавшихся в результате генной индукции ангиогенеза.
Цель – провести сравнительный анализ выживаемости эмбрионов и частоты наступления беременности после витрификации эмбрионов человека на разных стадиях преимплантационного развития.
Материал и методы. Было проанализировано 1311 эмбрионов. Для витрификации эмбрионов были использованы среды Irvine Scientific (США), носители открытого типа CryoTop (Япония). Витрификация и размораживание эмбрионов осуществлялись в соответствии с рекомендациями производителя. Статистическую обработку результатов выполняли на компьютере в среде статистических вычислений R (R v.3.5.3, RStudio v.1.1.463), первичный ввод данных проводили с помощью электронных таблиц MS Excel. В работе использовали методы описательной статистики, тесты для сравнения пропорций, в том числе точный биноминальный для малых выборок и одновыборочный тест пропорций с коррекцией непрерывности для больших выборок.
Результаты. Диапазон выживаемости эмбрионов достаточно широкий и составляет от 75 до 100%. При проведении детального анализа зависимости частоты наступления беременности от стадии замороженной бластоцисты, мы выявили прямую связь клинических показателей и структуры эмбрионов 5–6-х суток преимплантационного развития. Бластоцисты с наиболее высокой степенью сформированности внутренней клеточной массы и трофобласта в сочетании с высокой степенью экспансии дают наиболее высокие результаты частоты наступления клинической беременности.
Выводы. При проведении витрификации стадия развития бластоцисты влияет на их выживаемость и показатели частоты наступления беременности. Явление хетчинга у эмбрионов 5–6-х суток преимплантационного развития следует расценивать как фактор, понижающий успех витрификации.
Цель – изучить морфофункциональную реорганизацию тканей слизистой оболочки полости рта в ходе регенерации раневого дефекта при использовании полимерных мембран на основе сополимера винилиденфторида с тетрафторэтиленом и без него.
Материал и методы. Эксперимент проведен на 35 белых крысах линии Wistar массой 220–280 г. Животных разделили на три группы: 1-я группа – интактные особи, 2-я – экспериментальная группа сравнения и 3-я – основная экспериментальная группа. При иссечении лоскута слизистой оболочки у крыс формировали раневой дефект, который у крыс 3-й группы покрывали полимерной мембраной. Гистологическое и макроскопическое исследования проводили на 3-и, 7-е и 12-е сут.
Результаты. В 3-й группе развитие грануляционной и рыхлой волокнистой соединительной ткани происходило быстрее, что было отмечено уже на 3-и сут исследования. На 7-е сут в основной экспериментальной группе отмечалось уменьшение воспалительного инфильтрата в 1.5 раза, в то время как в экспериментальной группе сравнения этот показатель уменьшился всего в 1.35 раза. При этом, образование рыхлой волокнистой соединительной ткани в основной экспериментальной группе происходило в 3.2 раза интенсивнее, чем в группе сравнения. На 12-е сут удельная площадь рыхлой волокнистой соединительной ткани в экспериментальной основной группе была в 1.4 раза больше, а удельная площадь рубцовой ткани – в 3 раза меньше, чем в экспериментальной группе сравнения.
Выводы. При использовании полимерной мембраны по сравнению с открытым ведением раны наблюдалось уменьшение воспалительного инфильтрата, ускоренное созревание рыхлой волокнистой соединительной ткани, при этом образование плотной волокнистой соединительной ткани происходило значимо меньше. Таким образом, применение полимерной пьезоэлектрической мембраны может быть эффективным при ведении раневых дефектов слизистой оболочки полости рта.
В настоящее время смертность детей от таких заболеваний как синдром дыхательных расстройств, пневмоний и инфекций крайне высока. Нельзя исключить, что это связано с нарушением функционирования иммунной системы детей. Центральным органом иммунопоэза у детей является вилочковая железа, педиатры уделяют особое внимание гиперплазии тимуса. На сегодняшний день не сложилось единого мнения относительно природы и клинической значимости увеличения тимуса.
Цель исследования – изучить морфометрические показатели вилочковой железы у детей первого
года жизни при ее увеличении.
Материал исследования. Для анализа частоты встречаемости умерших детей с увеличенной вилочковой железой было проанализировано 764 протокола вскрытия детей за период с 2012 по 2017 годы и отобрано 117 случаев смерти детей первого года жизни. Вскрытия проводились на базе Объединенной детской прозектуры г. Саратова. Увеличение вилочковой железы у умерших детей первого года жизни было выявлено в 34% (40 случаев). Для гистологического исследования отобран секционный материал 32 детей (15 случаев с увеличенной вилочковой железой и 17 случаев без ее увеличения). Для установления соответствия массы тимуса возрасту и массе тела ребенка рассчитывали тимический индекс. Морфометрическое исследование выполняли при помощи микровизора mVizo-103.
Результаты. Установлено, что инфекционные заболевания являются фактором риска формирования тимомегалии у детей первого года жизни. При морфологическом исследовании было установлено, что увеличение вилочковой железы происходит, в основном, за счет увеличения коркового слоя на фоне уменьшения площади долек. Площадь дольки в исследуемой группе детей уменьшилась на 15%, а количество долек, граничащих в поле зрения, увеличивалось на 50%, относительно этих же показателей у детей в группе сравнения.
Заключение. В структуре причин смерти детей с увеличенной вилочковой железой преобладает инфекционная патология. В результате исследования было установлено, что гистологическими признаками тимомегалии являются увеличение количества граничащих долек тимуса в поле зрения и увеличение количества незрелых тимоцитов.
Цель работы – выявить морфологические изменения нейронов гиппокампа крыс после длительного (12-месячного) потребления избыточных доз фтора в ионном виде (F–).
Материал и методы. Самцы крыс линии Вистар были разделены на 4 группы. Животные из контрольной группы получали питьевую воду с фоновым содержанием F– 0.4 мг/л, крысам из других групп давали ту же воду с 5, 20 и 50 мг/л F– (в виде NaF). Морфологическое состояние нейронов зон СА3 и СА1 гиппокампа оценивали после окраски срезов мозга толуидиновым синим по методу Ниссля.
Результаты. Длительная интоксикация крыс F– привела к дезорганизации клеточного слоя и снижению численной плотности пирамидных нейронов в полях СА3 и СА1 гиппокампа, что, вероятнее всего, свидетельствует о гибели части клеток. В нейронах обеих зон гиппокампа визуализировались такие патологические изменения, как неравномерное распределение вещества Ниссля, смещение ядер к периферии, вакуолизация цитоплазмы. Некоторые нейроны набухали, другие, наоборот, сморщивались, выявлялись клетки веретенообразной формы и нейроны с винтообразными отростками. В гиппокампе крыс, получавших F–, снижалось число нормохромных, но увеличивалось количество гиперхромных и гипохромных нейронов.
Заключение. Установлено, что длительное потребление крысами F– в избыточных дозах индуцирует дистрофические и некробиотические изменения пирамидных нейронов в зонах СА3 и СА1 гиппокампа. Обнаруженные патологические изменения могут быть причиной нарушения межнейронных связей в гиппокампе и приводить к развитию различных неврологических и когнитивных расстройств.
Цель – выявить особенности макро- и микроскопического строения, а также клеточного состава желез толстой кишки взрослых людей при клинически подтвержденных тотальном долихомегаколоне и колоноптозе.
Материал и методы. На тотальных препаратах толстой кишки, полученных от трупов лиц 42–87 лет, исследовали структурные перестройки железистого аппарата при тотальном долихомегаколоне (n=7) и тотальном колоноптозе (n=5), диагностированных посмертно. Микроскопическое исследование проводили на гистологических препаратах, окрашенных метиленовым синим, с последующей фиксацией в насыщенном растворе молибденовокислого (пикриновокислого) аммония, гематоксилином и эозином, пирофуксином по Ван-Гизону. Для статистической обработки данных использовали методы параметрической и непараметрической статистики на основе программы Statistica 6.0. Статистическая обработка данных включала вычисление средневыборочных показателей, их ошибок.
Результаты. Проведенный анализ клеточного состава эпителия толстой кишки при тотальном долихомегаколоне выявил прогрессивное уменьшение количества желез в проксимо-дистальном направлении с 22.5±1.1% в слепой кишке до 37±0.9% в прямой кишке. Вместе с тем уменьшалась и длина желез в среднем на 26.5±0.8% для всех отделов толстой кишки без выраженного градиента от слепой к прямой кишке. Соответственно снижению длины кишечной железы наблюдалось уменьшение количества эпителиоцитов, образующих ее стенки наиболее выраженное в нисходящей ободочной кишке – на 21.4±1.1%. Структурные изменения при тотальном колоноптозе носили схожий характер и проявлялись существенным уменьшением железистого аппарата, однако достоверных различий с группой долихомегаколона выявлено не было. При анализе клеточного компонента желез толстой кишки отмечался разнонаправленный характер изменений состава желез: снижение процентного соотношения абсорбционных клеток в среднем на 21.1±0.8% и увеличение доли бокаловидных клеток на 33.4±1.2% в среднем, что обусловлено компенсаторным повышением продукции слизи при изучаемых патологических состояниях.
Заключение. Получены актуальные данные об уменьшении числа и изменении структуры железистого аппарата всех отделов толстой кишки людей зрелого возраста на фоне клинически верифицированных тотальных долихомегаколона и колоноптоза. Характер выявленных структурно-функциональных перестроек имеет существенное значение как для проктологической практики, так и для теоретической медицины в целом.
Цель работы – выявление особенностей реакций нейронов и клеток макроглии в лимбической церебральной коре при отравлении этанолом (ОЭ), алкогольной абстиненции (АА) и хронической алкогольной интоксикации (ХАИ) у человека.
Материал и методы. Гистологические срезы поля 24 б после окрашивания по Нисслю исследовали у здоровых людей (n=5), после смерти от ОЭ (в периоде резорбции этанола, n=5) и при АА (в конце элиминации этанола, n=5) у людей с ранними признаками алкогольной болезни. Подсчет численности и доли нейронов в идентификационных группах (неизмененных / малоизмененных, гипохромных, сморщенных гиперхромных, «клеток-теней»), числа клеток-сателлитов и отношения клеток-сателлитов к числу малоизмененных нейронов (глио-нейронального индекса), установление средней площади тел нейронов проводили на горизонтальных срезах передней лимбической коры (ПЛК) площадью 1 мм2.
Результаты. Воздействие этанола на головной мозг провоцирует развитие острой (или преходящей), отсроченной и хронической реакции нейральных клеток. Острая реакция, развивающаяся при ОЭ, выражается отеком-набуханием нейронов и является следствием комбинации альтерирующих фактров: токсического воздействия этанола и гиперпродукции катехоламинов. Острая реакция более выражена в дофаминергичкеском слое III ПЛК, чем в слое V. Она является преходящей, поскольку при АА (элиминации этанола) она регрессирует и переходит в отсроченную. Последняя заключается в увеличении и преобладании доли атрофически уменьшенных в размерах малоизмененных и атрофически сморщенных нейронов, усилении фагоцитарной активности погибших нейронов, а также развитии компенсаторноприспособительной реакции сателлитной глии, наиболее выраженной в слое III. Отсроченная реакция нейронов обусловлена ослаблением и прекращением острых влияний токсикантов, в результате которых на первый план выступают признаки предшествовавших длительных интоксикационных влияний этанола, его токсичных метаболитов и повышенных концентраций катехоламинов, вызвавшие атрофию клеток. Хроническая реакция клеток выражается значительным увеличением доли «клеток-теней», числа клеток макроглии и атрофическим сморщиванием нейронов. У лиц с ранними проявлениями алкогольной болезни признаки острого повреждения нейронов сочетаются с признаками атрофических.
Цель исследования заключалась в сравнительной оценке характеристик жирового перерождения тимуса у человека и у позвоночных животных, обитающих в естественной и антропогенной среде.
Материал и методы. С использованием методов световой микроскопии проведено сравнительное морфологическое исследование тимуса у половозрелых представителей человека и позвоночных животных, относящихся к четырем классам: Земноводные (Amphibia), Пресмыкающиеся (Reptilia), Птицы (Aves), Млекопитающие (Mammalia).
Результаты исследования свидетельствуют об отсутствии жирового перерождения тимуса у подавляющего большинства животных, обитающих в природной среде. Лишь у ежа белогрудого в силу специфических особенностей биологии в тимусе появляется незначительное количество жировой ткани (0,38±0,041%) в области междольковых септ. Жирового замещения лимфоидной ткани тимуса у ежа не происходит, поскольку жировые клетки остаются отделенными от лимфоцитов и ретикуло-эпителиальной стромы соединительнотканными волокнами междольковых септ. У позвоночных животных, находящихся в условиях виварного содержания, а также у человека, выраженность жирового перерождения увеличивается в десятки раз вследствие воздействия гиподинамии. Обнаружено, что во втором периоде зрелости площадь, занимаемая жировой тканью, в тимусе половозрелой норки американской достигает 3.07±0.68%, у беспородной крысы – 28.4±4.1% и у человека – 39.15±6.65%. Ранние сроки начала жирового перерождения и наибольшая выраженность данного явления в тимусе человека связаны не только с влиянием гипокинезии и избыточным поступлением калорий, но и обусловлены комплексом других неблагоприятных воздействий, которые в изобилии встречаются в антропогенной среде.
Заключение. Таким образом, жировое перерождение не является обязательным следствием возрастной инволюции лимфоидной системы, а скорее всего, возникает в результате влияния специфических условий существования.
ОБЗОРНЫЕ СТАТЬИ
МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Выявление кровеносных сосудов и оценка их функционального состояния является важной задачей современной гистологии.
Целью представленной работы стала разработка метода двойного иммунофлуоресцентного окрашивания для изучения разных типов кровеносных сосудов в легком крысы.
Материал и методы. Материалом для исследования служили образцы правого и левого легкого половозрелых (3–5 мес) крыс-самцов породы Вистар (n=5). Для выявления кровеносных сосудов использовали кроличьи поликлональные антитела к фактору Виллебранда (Agilent, США) и мышиные моноклональные (клон 1А4) антитела к гладкомышечному α-актина (Agilent, США). Анализ препаратов проводили с применением метода конфокальной лазерной микроскопии.
Результаты. В рамках представленной работы был разработан протокол двойного иммунофлуоресцентного окрашивания, позволяющий с высокой селективностью выявлять кровеносные сосуды разных типов в легком крысы. Использование в качестве одного из маркеров фактора Виллебранда позволяет легко идентифицировать эндотелий кровеносных сосудов. Добавление второго маркера – гладкомышечного α-актина – дает возможность выявлять слой гладких моицитов, особенности строения которого позволяют определить тип кровеносного сосуда (его принадлежность к артериальному или венозному руслу). Предложенный протокол характеризуется хорошей воспроизводимостью и позволяет получать препараты высокого качества. Вследствие высокой специфической иммунореактивности используемых антител из протокола окраски может быть удален этап теплового демаскирования антигенов, что делает его менее трудоемким, сокращает время изготовления препаратов и обеспечивает лучшую сохранность срезов. Использование в качестве маркеров фактора Виллебранда и гладкомышечного α-актина делает возможным оценку не только структуры, но и функционального статуса изучаемых кровеносных сосудов, что обуславливает перспективность использования предложенного метода для научных и клиникодиагностических исследований.
ИСТОРИЯ МОРФОЛОГИИ
Во второй статье «Николай Иванович Пирогов как новатор в анатомии, хирургии и анестезиологии», авторы уделяют большое внимание его профессиональной карьере анатома, хирурга и анестезиолога. Авторы этих двух частей хотят подчеркнуть, что эти две статьи являются выдержкой из ранее опубликованных обширных статей, касающихся Николая Ивановича Пирогова. Читатели могут найти эти статьи в списке литературы под именем первого автора [20–25].