anatomyЖурнал анатомии и гистопатологииJournal of Anatomy and Histopathology2225-7357N.N. Burdenko Voronezh State Medical University10.18499/2225-7357-2021-10-2-9-22anatomy-1302Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯORIGINAL PAPERSТемные нейроны сенсомоторной коры белых крыс после острой неполной ишемии в аспекте артефактов фиксации и нейроглиальных взаимоотношенийDark Neurons of the Sensorimotor Cortex of White Rats after Acute Incomplete Ischemia in Terms of Artifacts Fixation and Neuroglial RelationshipsАвдеевД. Б.AvdeevD. B.СтепановС. С.StepanovS. S.ГорбуноваА. В.GorbunovaA. V.ШороноваА. Ю.ShoronovaA. Yu.МакарьеваЛ. М.Makar'evaL. M.АкулининВ. А.AkulininV. A.

Акулинин Виктор Александрович

ул. Ленина, 12, г. Омск, 644099

Victor Akulinin

 ul. Lenina, 12, Omsk, 644099

v_akulinin@outlook.comКоржукМ. С.KorzhukM. S.ЗаболотныхМ. В.ZabolotnykhM. V.ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава РоссииOmsk State Medical University, OmskФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава России; ФГБОУ ВО «Омский государственный аграрный университет им. П. А. Столыпина»Omsk State Medical University; P.A. Stolypin Omsk State Agrarian University, OmskФГБОУ ВО «Омский государственный аграрный университет им. П. А. Столыпина»P.A. Stolypin Omsk State Agrarian University, Omsk202113072021102922Copyright © Авдеев Д.Б., Степанов С.С., Горбунова А.В., Шоронова А.Ю., Макарьева Л.М., Акулинин В.А., Коржук М.С., Заболотных М.В., 20212021Авдеев Д.Б., Степанов С.С., Горбунова А.В., Шоронова А.Ю., Макарьева Л.М., Акулинин В.А., Коржук М.С., Заболотных М.В.Avdeev D.B., Stepanov S.S., Gorbunova A.V., Shoronova A.Y., Makar'eva L.M., Akulinin V.A., Korzhuk M.S., Zabolotnykh M.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://anatomy.elpub.ru/jour/article/view/1302

Цель  –изучить морфофункциональные признаки формирования «темных нейронов» сенсомоторной коры (СМК) большого мозга половозрелых белых крыс в норме и после 40-минутной окклюзии общих сонных артерий (ООСА).

Материал и методы

Материал и методы.Острую ишемию моделировали на белых крысах Wistar путем 40-минутной ООСА. Головной мозг фиксировали иммерсионным и перфузионным способами. Проводили сравнительную морфометрическую оценку цито-и глиоцитоархитектоники неокортекса в норме (n=6), через 1 (n=6), 3 (n=6) и 7 сут (n=6) после ООСА. Использовали окраски по Нисслю, гематоксилином и эозином, иммуно-гистохимическое  типирование  NSE,  MAP-2,  HSP-70,  p38,  CASP3,  GFAP  и  AIF1.  Определяли  численную плотность  нормохромных  и  гиперхромных  (темных)  пирамидных  нейронов,  олигодендроцитов  (ОДЦ), микроглиоцитов (МГЦ), а также относительную площадь зон отека–набухания. Проверку статистических гипотез проводили с помощью непараметрических методов в программе Statistica 8.0.

Результаты

Результаты. Способ  фиксации  головного  мозга  существенно  влиял  на  содержание  артефактных темных нейронов (АТН), которые по морфологии и тинкториальным свойствам похожи надегенеративно измененные темные нейроны (ДТН). Появление обратимо и необратимо измененных ДТН после ООСА в СМК сопровождалось увеличением относительной площади зон отека–набухания (контроль –5.4%, 1-е сут –17.6%). Максимальное содержание ДТН (53%) выявлено в слое V через 7 сут после ишемии. По данным иммуногистохимического типирования NSE, MAP-2, HSP-70, p38, CASP3, специфические белки большей части  ДТН  сохранялись,  обеспечивая  их  восстановление  и  функционирование  нейронных  сетей.  Общая численная плотность нейронов СМК через 7 сут в слое III уменьшалась на 26.4% (p=0.001), а в слое V –на 18.5%  (Mann–Whitney  U  Test;  p=0.01).  Выявленные  изменения  носили  диффузно-очаговый  характер.

В зонах скопления ДТН увеличивалось содержание астроцитов, микроглиоцитов (МГЦ) и олигодендроцитов (ОДЦ). Нейро-астроглиальный индекс (контроль –1.62) через 3 сут после ООСА увеличивался до 2.72. Пик численной плотности МГЦ отмечен через 1 сут, а ОДЦ –через 7 сут после острой неполной ишемии (Mann–Whitney U Test; p0.001).

Заключение

Заключение.После 40-минутной окклюзии общих сонных артерий в слоях III и V сенсомоторной коры на фоне гидропической дистрофии были выявлены темные нейроны, цитоморфологические характеристики  которых  свидетельствовали  о  наличии  динамики  их  прижизненных  дегенеративных  изменений. Восстановление дегенеративно измененных темных нейронов сопровождалось увеличением количества  сателлитарных  олигодендроцитов,  астроцитов  и  микроглиоцитов. Выявленные  изменения  рассматривались как один из вариантов обратимых изменений нейронов в ответ на умеренное ишемическое повреждение.

The aimof research was to study morphofunctional signs of the sensorimotor "dark neurons" formation in the cerebrum of sexually mature white rats under normal conditions and in 40 minutesafter the common carotid arteries (CCA) occlusion.

Material and methods

Material and methods.Acute ischemia was simulated in white Wistar rats by a 40-min CCA occlusion. The brain was fixed by immersion and perfusion methods. A comparative morphometric assessment of cyto-and gliocytoarchitectonics of the neocortex was carried out under normal conditions (n = 6), 1 (n = 6), 3 (n= 6), and in 7 days (n = 6) after the common carotid arteries (CCA) occlusion. The Nissl staining, hematoxylin and eosin staining, immunohistochemical typing NSE, MAP-2, HSP-70, p38, CASP3, GFAP and AIF1 were applied. The numerical density of normochromic and hyperchromic (dark) pyramidal neurons, oligodendrocytes, microgliocytes, and the relative area of edema –swelling zones were determined. Statistical hypotheses were tested by nonparametric methods using Statistica 8.0 software.

Results

Results.The method of the brain fixation significantly influenced the content of the artifact dark neurons,which are similar in morphology and tinctorial properties to degeneratively altered dark neurons. The appearance of reversibly and irreversibly degeneratively altered dark neurons in the sensorimotor cortex after the CCA occlusion was accompanied by an increase in the relative area of edema  –swelling zones (control  –5.4%, 1st day  –17.6%). The maximum content of degeneratively altered dark neurons (53%) was found in layer V in 7 days after ischemia. According to the findings of immunohistochemical typing NSE, MAP-2, HSP-70, p38, CASP3, the specific proteins of the most degeneratively altered dark neurons were retained, ensuring their restoration and the neural network functioning. The total number density of sensorimotor neurons decreased by 26.4% (p =0.001) in layer III, and by 18.5% in layer V (Mann –Whitney U Test; p = 0.01) in 7 days after the intervention. The revealed changes were of a diffuse focal character. In the zones of degeneratively altered dark neurons accumulation, the content of astrocytes, microgliocytes and oligodendrocytes increased. The neuro-astroglial index (control  –1.62) increased to 2.72 in 3 days after the CCA occlusion. The peak in the number density of microgliocyte s was noted in 1 day, and the oligodendrocytes in 7 days after acute incomplete ischemia (Mann –Whitney U Test; p0.001).

Conclusion

Conclusion.After a 40-minute common carotid arteries occlusion, dark neurons were detected in layers III and V of the sensorimotor cortex with underlying hydropic dystrophy; their cytomorphological pro perties indicated the dynamics of their in vivo degenerative changes. Restoration of degeneratively altered dark neurons was accompanied  by  an  increase  in  the  number  of  satellite  oligodendrocytes,  astrocytes  and  microgliocytes. The  revealed changes were considered as one of the variants of reversible changes in neurons in response to moderate ischemic damage.

острая ишемиянеокортекстемные нейроныастроглиямикроглияиммуногистохимияморфометриякрысы Wistaracute ischemianeocortexdark neuronsastrogliamicrogliaimmunohistochemistrymorphometryWistar ratsReferencesАвдеев Д.Б., Акулинин В.А., Степанов А.С., Горбунова А.В., Степанов С.С. Плейотропные ферменты апоптоза и синаптическая пластичность гиппокампа белых крыс после окклюзии общих сонных артерий. Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины. 2018;33(3):102–10Avdeev DV, Akulinin VA, Stepanov AS, Gorbunova AV, Stepanov SS. Pleiotropic enzymes of apoptosis and synaptic plasticity in albino rat hippocampus after occlusion of common carotid arteries. The Siberian Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2018;33(3):102–10] (in Russian). doi:10.29001/2073-8552-2018-33-3-102-110Алексеева О.С., Кирик О.В., Гилерович Е.Г., Коржевский Д.Э. Микроглия головного мозга: происхождение, структура и функции. Журнал эволюционной биохимии и физиологии. 2019;55(4):231–41Alekseeva OS, Kirik OV, Gilerovich EG, Korzhevskii DE. Microglia of the brain: origin, structure and functions. Journal of Evolutionary Biochemistry and Physiology. 2019;55(4):231–41] (in Russian). doi: 10.1134/S0044452919040028Бонь Е.И., Максимович Н.Е., Зиматкин С.М.Морфологические нарушения нейронов гиппокампа крыс с субтотальной и тотальной ишемией. Оренбургский медицинский вестник. 2020;8(2):41–6Bon EI, Maksimovich NE, Zimatkin SM. Morphological disorders in the neurons of the rats hippocampus with subtotal and total ischemia. Orenburg Medical Herald. 2020;8(2):41–6] (in Russian).Боровиков В.Statistica. Искусство анализа данных на компьютере. Санкт-Петербург: Питер. 2003Borovikov V. Statistica. Iskusstvo analiza dannyh na komp'yutere. Sankt-Peterburg: Piter. 2003] (in Russian).Васильев Д.С., Туманова Н.Л., Журавин И.А., и др. Морфофункциональные изменения в поле СА1 гиппокампа крыс при использовании пентилентетразоловой и литий-пилокарпиновой моделей судорожных состояний. Журнал эволюционной биохимии и физиологии. 2014;50(6):463–69Vasil’ev DS, Tumanova NL, Zhuravin IA, et al. Morphofunctional changes in field CA1 of the rat hippocampus after pentylenetetrazole and lithium-pilocarpine induced seizures. Journal of Evolutionary Biochemistry and Physiology. 2014;50(6):531–8] (in Russian).Зиматкин С.М., Бонь Е.И. Темные нейроны мозга. Морфология. 2017;152(6):81–6Zimatkin SM, Bon' EI. "Dark" brain neurons. Morphology. 2017;152(6):81–6] (in Russian).Шертаев М.М., Ибрагимов У.К., Икрамова С.К., и др. Морфологические изменения в тканях головного мозга при экспериментальной ишемии. Вестник НГПУ. 2015;1(23):72–9Shertaev MM, Ibragimov UK, Ikramova SK, et al. Morphological changes in brain tissues after experimental ischemia. Novosibirsk State Pedagogical University Bulletin. 2015;1(23):72–9] (in Russian) doi: 10.15293/2226-3365.1501.07Степанов А.С., Акулинин В.А., Степанов С.С., Авдеев Д.Б. Клеточные системы восстановления и утилизации поврежденных нейронов головного мозга белых крыс после 20-мин окклюзии общих сонных артерий. Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2017(а);103(10): 1135–47Stepanov AS, Akulinin VA, Stepanov SS, Avdeev DB. Cellular systems for the recovery and utilization of damaged brain neurons in white rats after a 20-minute occlusion of common carotid arteries. Russian Journal of Physiology. 2017;103(10):1135–47] (in Russian).Степанов А.С., Акулинин В.А., Мыцик А.В., Степанов С.С., Авдеев Д.Б. Нейро-глио-сосудистые комплексы головного мозга после острой ишемии. Общая реаниматология. 2017(б);13(6): 6–17Stepanov AS, Akulinin VA, Mysik AV, Stepanov SS, Avdeev DB. Neuro-GlioVascular Complexes of the Brain After Acute Ischemia. General Reanimatology. 2017 Jan 1;13(6):6–17] (in Russian). doi: 10.15360/1813-9779-2017-6-6-17Степанов С.С., Акулинин В.А., Авдеев Д.Б., Степанов А.С., Горбунова А.В. Структурно-функциональная реорганизация ядрышкового аппарата нейронов неокортекса, архикортекса и базальных ганглиев головного мозга белых крыс после 20-минутной окклюзии общих сонных артерий. Журнал анатомии и гистопатоло-гии. 2018;7(4): 67–74Stepanov SS, Akulinin VA, Avdeev DB, Stepanov AS, Gorbunova AV. Structural-functional Reorganization of the Nucleolar Apparatus of Neurons of the Neocortex, Archicortex and Basal Ganglia of the Brain of White Rats After a 20-minute Occlusion of the Common Carotid Arteries. Journal of Anatomy and Histopathology. 2019 Jan 11;7(4):67–74] (in Russian). doi: 10.18499/2225-7357-2018-7-4-67-74Степанов С.С., Кошман И.П., Шоронова А.Ю., и др.Структурные основы изменения межнейронной коммуникации нейронов поля СА3 гиппокампа белых крыс после тяжелой черепно-мозговой травмы. Патологическая физио-логия и экспериментальная терапия. 2021;65(1): 22–34Stepanov SS, Koshman IP, Shoronova AYu, et al. The structural base for changes in the interneuronal communication of ca3 neurons in the hippocampus of white rats after severe traumatic brain injury. Pathological physiology and experimental therapy. 2021;65(1): 22–34] (in Russian).Торшин В.И., Кастыро И.В., Костяева М.Г., и др. Влияние экспериментального моделирования септопластики на цитоархитектонику гип-покампа у крыс. Голова и шея. 2019;7(4): 33–41[Torshin VI, Kastyro IV, Kostyaeva MG, et al. The effect of experimental modeling of septoplasty 33-41 on rat hippocampal cytoarchitectonics. Head and neck. 2019;7(4): 33–41] (in Russian). doi: 10.25792/HN.2020.8.2.33–38Шляхто Е.В., Баранцевич Е.Р., Щербак Н.С., Галагудза М.М. Молекулярные механизмы формирования ишемической толерантности головного мозга. Часть 1. Вестник РАМН. 2012; 6: 42–50Shlyakhto EV, Barantsevich ER, Shcherbak NS, Galagudza MM. Molecular mechanisms of development of cerebral tolerance to ischemia. Part 1. Annals of the Russian academy of medical sciences. 2012 Jun 23;67(6):42–50] (in Russian).Яковлев А.А., Гуляева Н.В. Прекондиционирование клеток мозга к патологическим воздей-ствиям: вовлеченность протеаз (обзор). Био-химия. 2015;80(2): 204–13Yakovlev AA, Gulyaeva NV. Possible role of proteases in preconditioning of brain cells to pathological conditions. Biochemistry (Moscow). 2015;80(2): 204–13] (in Russian).Ahmadpour S, Behrad A, Vega IF.Dark Neurons: A protective mechanism or a mode of death. Journal of Medical Histology. 2019 Dec 1;3(2):125–31. doi: 10.21608/JMH.2020.40221.1081Ahmadpour S, Behrad A, Vega IF.Dark Neurons: A protective mechanism or a mode of death. Journal of Medical Histology. 2019 Dec 1;3(2):125–31. doi: 10.21608/JMH.2020.40221.1081Alawieh A, Langley EF, Tomlinson S. Targeted complement inhibition salvages stressed neurons and inhibits neuroinflammation after stroke in mice. Science Translational Medicine. 2018 May 16;10(441):eaao6459. doi: 10.1126/scitranslmed.aao6459Alawieh A, Langley EF, Tomlinson S. Targeted complement inhibition salvages stressed neurons and inhibits neuroinflammation after stroke in mice. Science Translational Medicine. 2018 May 16;10(441):eaao6459. doi: 10.1126/scitranslmed.aao6459Bisicchia E, Sasso V, Molinari M, Viscomi MT.Plasticity of microglia in remote regions after focal brain injury. Seminars in Cell & Developmental Biology. 2019 Oct;94:104–11. doi: 10.1016/j.semcdb.2019.01.011Bisicchia E, Sasso V, Molinari M, Viscomi MT.Plasticity of microglia in remote regions after focal brain injury. Seminars in Cell & Developmental Biology. 2019 Oct;94:104–11. doi: 10.1016/j.semcdb.2019.01.011Bolon B, Garman R, Jensen K, Krinke G, Stuart B.A “Best Practices” Approach to Neuropathologic Assessment in Developmental Neurotoxicity Testing—for Today. Toxicologic Pathology. 2006 Apr;34(3):296–313. doi: 10.1080/01926230600713269Bolon B, Garman R, Jensen K, Krinke G, Stuart B.A “Best Practices” Approach to Neuropathologic Assessment in Developmental Neurotoxicity Testing—for Today. Toxicologic Pathology. 2006 Apr;34(3):296–313. doi: 10.1080/01926230600713269Castro OW, Furtado MA, Tilelli CQ, Fernandes A, Pajolla GP, Garcia-Cairasco N. Comparative neuroanatomical and temporal characterization of FluoroJade-positive neurodegeneration after status epilepticus induced by systemic and intrahippocampal pilocarpine in Wistar rats. Brain Research. 2011 Feb;1374:43–55. doi: 10.1016/j.brainres.2010.12.012Castro OW, Furtado MA, Tilelli CQ, Fernandes A, Pajolla GP, Garcia-Cairasco N. Comparative neuroanatomical and temporal characterization of FluoroJade-positive neurodegeneration after status epilepticus induced by systemic and intrahippocampal pilocarpine in Wistar rats. Brain Research. 2011 Feb;1374:43–55. doi: 10.1016/j.brainres.2010.12.012Chen Z, Trapp BD.Microglia and neuroprotection. Journal of Neurochemistry. 2015 Mar 10;136:10–7. doi: 10.1111/jnc.13062Chen Z, Trapp BD.Microglia and neuroprotection. Journal of Neurochemistry. 2015 Mar 10;136:10–7. doi: 10.1111/jnc.13062Cole JH, Jolly A, de Simoni S, Bourke N, Patel MC, Scott G, et al. Spatial patterns of progressive brain volume loss after moderatesevere traumatic brain injury. Brain. 2018 Jan 4;141(3):822–36. doi: 10.1093/brain/awx354Cole JH, Jolly A, de Simoni S, Bourke N, Patel MC, Scott G, et al. Spatial patterns of progressive brain volume loss after moderatesevere traumatic brain injury. Brain. 2018 Jan 4;141(3):822–36. doi: 10.1093/brain/awx354Eyo UB, Dailey ME. Microglia: Key Elements in Neural Development, Plasticity, and Pathology. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 2013 Jan 27;8(3):494–509. doi: 10.1007/s11481-013-9434-zEyo UB, Dailey ME. Microglia: Key Elements in Neural Development, Plasticity, and Pathology. Journal of Neuroimmune Pharmacology. 2013 Jan 27;8(3):494–509. doi: 10.1007/s11481-013-9434-zGallyas F, Pál J, Bukovics P. Supravital microwave experiments support that the formation of “dark” neurons ispropelled by phase transition in an intracellular gel system. Brain Research. 2009 May;1270:152–6. doi: 10.1016/j.brainres.2009.03.020Gallyas F, Pál J, Bukovics P. Supravital microwave experiments support that the formation of “dark” neurons ispropelled by phase transition in an intracellular gel system. Brain Research. 2009 May;1270:152–6. doi: 10.1016/j.brainres.2009.03.020Garman RH. Histology of the Central Nervous System. Toxicologic Pathology. 2010 Nov 30;39(1):22–35. doi: 10.1177/0192623310389621Garman RH. Histology of the Central Nervous System. Toxicologic Pathology. 2010 Nov 30;39(1):22–35. doi: 10.1177/0192623310389621Graeber MB, Blakemore WF, Kreutzberg GW.Cellular pathology of the central nervous system. In: Graham DI, Lantos PL. Greenfield’s neuropath. 1. London. Arnold. 2002.Graeber MB, Blakemore WF, Kreutzberg GW.Cellular pathology of the central nervous system. In: Graham DI, Lantos PL. Greenfield’s neuropath. 1. London. Arnold. 2002.Harris TC, de Rooij R, Kuhl E. The Shrinking Brain: Cerebral Atrophy Following Traumatic Brain Injury. Annals of Biomedical Engineering. 2019;47(9):1941–59. doi: 10.1007/s10439-018-02148-2Harris TC, de Rooij R, Kuhl E. The Shrinking Brain: Cerebral Atrophy Following Traumatic Brain Injury. Annals of Biomedical Engineering. 2019;47(9):1941–59. doi: 10.1007/s10439-018-02148-2Jortner B. The return of the dark neuron. A histological artifact complicating contemporary neurotoxicologic evaluation. NeuroToxicology. 2006 Jul;27(4):628–34. doi: 10.1016/j.neuro.2006.03.002Jortner B. The return of the dark neuron. A histological artifact complicating contemporary neurotoxicologic evaluation. NeuroToxicology. 2006 Jul;27(4):628–34. doi: 10.1016/j.neuro.2006.03.002Kim JY, Barua S, Huang MY, Park J, Yenari MA, Lee JE.Heat Shock Protein 70 (HSP70) Induction: Chaperonotherapy for Neuroprotection after Brain Injury. Cells. 2020 Sep 2;9(9):2020. doi: 10.3390/cells9092020Kim JY, Barua S, Huang MY, Park J, Yenari MA, Lee JE.Heat Shock Protein 70 (HSP70) Induction: Chaperonotherapy for Neuroprotection after Brain Injury. Cells. 2020 Sep 2;9(9):2020. doi: 10.3390/cells9092020Belov Kirdajova D, Kriska J, Tureckova J, Anderova M. Ischemia-Triggered Glutamate Excitotoxicity From the Perspective of Glial Cells. Frontiers in Cellular Neuroscience. 2020 Mar 19;14. doi: 10.3389/fncel.2020.00051Belov Kirdajova D, Kriska J, Tureckova J, Anderova M. Ischemia-Triggered Glutamate Excitotoxicity From the Perspective of Glial Cells. Frontiers in Cellular Neuroscience. 2020 Mar 19;14. doi: 10.3389/fncel.2020.00051Kövesdi E, Pál J, Gallyas F. The fate of “dark” neurons produced by transient focal cerebral ischemia in a non-necrotic and non-excitotoxic environment: Neurobiological aspects. Brain Research. 2007 May;1147:272–83. doi: 10.1016/j.brainres.2007.02.011Kövesdi E, Pál J, Gallyas F. The fate of “dark” neurons produced by transient focal cerebral ischemia in a non-necrotic and non-excitotoxic environment: Neurobiological aspects. Brain Research. 2007 May;1147:272–83. doi: 10.1016/j.brainres.2007.02.011Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons. Physiological Reviews. 1999 Jan 10;79(4):1431–568. doi: 10.1152/physrev.1999.79.4.1431Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons. Physiological Reviews. 1999 Jan 10;79(4):1431–568. doi: 10.1152/physrev.1999.79.4.1431Lychko VS, Malakhov VA, Potapov AA.Morphological Changes of the Brain Tissue in Rats with Experimental Model of Ischemic Stroke in the Dynamics of Treatment by Immunobiological Preparation Cryocell-Cryocord. Sovremennye tehnologii v medicine. 2015 Dec;7(4):58–63. doi: 10.17691/stm2015.7.4.07Lychko VS, Malakhov VA, Potapov AA.Morphological Changes of the Brain Tissue in Rats with Experimental Model of Ischemic Stroke in the Dynamics of Treatment by Immunobiological Preparation Cryocell-Cryocord. Sovremennye tehnologii v medicine. 2015 Dec;7(4):58–63. doi: 10.17691/stm2015.7.4.07Morgan BP, Harris CL. Complement, a target for therapy in inflammatory and degenerative diseases. Nature Reviews Drug Discovery. 2015 Oct 23;14(12):857–77. doi: 10.1038/nrd4657Morgan BP, Harris CL. Complement, a target for therapy in inflammatory and degenerative diseases. Nature Reviews Drug Discovery. 2015 Oct 23;14(12):857–77. doi: 10.1038/nrd4657Müller GJ, Stadelmann C, Bastholm L, Elling F, Lassmann H, Johansen FF. Ischemia Leads to Apoptosis-and Necrosis-like Neuron Death in the Ischemic Rat Hippocampus. Brain Pathology. 2006 Apr 5;14(4):415–24. doi: 10.1111/j.1750-3639.2004.tb00085.xMüller GJ, Stadelmann C, Bastholm L, Elling F, Lassmann H, Johansen FF. Ischemia Leads to Apoptosis-and Necrosis-like Neuron Death in the Ischemic Rat Hippocampus. Brain Pathology. 2006 Apr 5;14(4):415–24. doi: 10.1111/j.1750-3639.2004.tb00085.xOoigawa H, Nawashiro H, Fukui S, Otani N, Osumi A, Toyooka T, et al. The fate of Nisslstained dark neurons following traumatic brain injury in rats: difference between neocortex and hippocampus regarding survival rate. Acta Neuropathologica. 2006 Jul 21;112(4):471–81. doi: 10.1007/s00401-006-0108-2Ooigawa H, Nawashiro H, Fukui S, Otani N, Osumi A, Toyooka T, et al. The fate of Nisslstained dark neurons following traumatic brain injury in rats: difference between neocortex and hippocampus regarding survival rate. Acta Neuropathologica. 2006 Jul 21;112(4):471–81. doi: 10.1007/s00401-006-0108-2Paxinos G, Watson C.The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. 5-th ed. San Diego: Elsevier Academic Press. 2005.Paxinos G, Watson C.The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. 5-th ed. San Diego: Elsevier Academic Press. 2005.Rami A. Review: Autophagy in neurodegeneration: firefighter and/or incendiarist? Neuropathology and Applied Neurobiology. 2009 Oct;35(5):449–61. doi: 10.1111/j.1365-2990.2009.01034.xRami A. Review: Autophagy in neurodegeneration: firefighter and/or incendiarist? Neuropathology and Applied Neurobiology. 2009 Oct;35(5):449–61. doi: 10.1111/j.1365-2990.2009.01034.xSchmued LC, Hopkins KJ. Fluoro-Jade: Novel Fluorochromes for Detecting Toxicant-Induced Neuronal Degeneration. Toxicologic Pathology. 2000 Jan;28(1):91–9. doi: 10.1177/019262330002800111Schmued LC, Hopkins KJ. Fluoro-Jade: Novel Fluorochromes for Detecting Toxicant-Induced Neuronal Degeneration. Toxicologic Pathology. 2000 Jan;28(1):91–9. doi: 10.1177/019262330002800111Soontornniyomkij V, Chang RC, Soontornniyomkij B, Schilling JM, Patel HH, Jeste DV.Loss of Immunohistochemical Reactivity in Association With Handling-Induced Dark Neurons in Mouse Brains. Toxicologic Pathology. 2020 Jan 3;48(3):437–45. doi: 10.1177/0192623319896263Soontornniyomkij V, Chang RC, Soontornniyomkij B, Schilling JM, Patel HH, Jeste DV.Loss of Immunohistochemical Reactivity in Association With Handling-Induced Dark Neurons in Mouse Brains. Toxicologic Pathology. 2020 Jan 3;48(3):437–45. doi: 10.1177/0192623319896263Wagner D-C, Scheibe J, Glocke I, et al. Objectbased analysis of astroglial reaction and astrocyte subtype morphology after ischemic brain injury. Acta neurobiol. Exper. 2013. 73(1):79–87.Wagner D-C, Scheibe J, Glocke I, et al. Objectbased analysis of astroglial reaction and astrocyte subtype morphology after ischemic brain injury. Acta neurobiol. Exper. 2013. 73(1):79–87.Zille M, Farr TD, Przesdzing I, Müller J,perimental Focal Cerebral Ischemia: Promises, Problems, and Perspectives. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2011 Nov 16;32(2):213–31. doi: 10.1038/jcbfm.2011.150Zille M, Farr TD, Przesdzing I, Müller J,perimental Focal Cerebral Ischemia: Promises, Problems, and Perspectives. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 2011 Nov 16;32(2):213–31. doi: 10.1038/jcbfm.2011.150

The authors declare that there are no conflicts of interest present.